Validation des inhibiteurs de la hyaluronidase 1

Résumé

L' acide hyaluronique ou HA est un composant important et essentiel de la matrice extracellulaire (MEC), en particulier de la MEC présente à la surface des cellules endothéliales : le glycocalyx endothélial. Ce polysaccharide de haut poids moléculaire est
dégradé par une famille d'enzymes appelées les hyaluronidases. Des études antérieures réalisées dans notre laboratoire ont montré que la déficience en hyaluronidase 1 (HYAL1) - une des principales hyaluronidases présentes au niveau somatique- apporte une protection contre les complications vasculaires liées au diabète, dans un modèle de souris diabétiques, via un glycocalyx plus robuste. La déficience en HYAL 1 préserve la barrière de filtration glomérulaire ainsi que la fonction endothéliale médiées par l' hyperpolarisation des cellules endothéliales, premières étapes dans le développement des complications micro- et macrovasculaires. L' inhibition de HY ALl a donc été proposée comme une cible thérapeutique pour ralentir le développement des complications vasculaires du diabète. De même l' inhibition de HYAL I est proposée comme cible thérapeutique dans certains cancers où le caractère invasif de la tumeur a été mis en relation avec une surexpression de HY AL l et l'augmentation de production de HA de faible poids moléculaire qui favorise la synthèse de métalloprotéases, l' angiogenèse et la migration des cellules tumorales. Le but de cette étude est de mesurer les capacités d' inhibition de HYALl (forme recombinante humaine) par quelques inhibiteurs connus des hyaluronidases, comme l'acide glycyrrhizique (GA), l' acide L ascorbique 6 palmitate (Ve pal) et l' héparine. Ainsi que la capacité d'inhibition de nouveaux inhibiteurs potentiels comme des HA sulfatés (HA-S) de différents poids moléculaires: 13 et 350 kDa portant une chaine palmitate, des hexamères de HA-S portant une chaine palmitate (HA6-S Cl6) ou béhénate (HA6-S C22) et l' hyaluromycine. Les différents inhibiteurs ont été testés au travers de trois techniques de mesure de l'activité hyaluronidasique: le test de Reissig, la zymographie et l' électrophorèse de fragments de HA résultants de la digestion. Ce travail a permis de démontrer l'efficacité des inhibiteurs via le test de Reissig et la zymographie. Parmi les inhibiteurs dont nous disposions, seul le HA6-S Cl6 n'a pu être validé en tant qu' inhibiteur de HYAL l ; par contre GA, Ve pal, l'héparine, HA-S 350 kDa, HA-S 13 kDa, le HA6-S C22 et l' hyaluromycine ont montré une diminution dose- dépendante de l'activité de la rhuHYALI. Des mesures supplémentaires sur l'aspect fonctionnel du glycocalyx en cultures cellulaires sont à prévoir afin de sélectionner le meilleur inhibiteur et analyser, en cristallographie, l'interaction entre l'enzyme HYAL l et celui-ci.

la date de réponse	2018
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Bruno Flamion (Promoteur)