Mise au point du criblage immunologique d'une banque de peptides aléatoire sur phages

Résumé

Nous avons mis au point les techniques de criblage d'une banque de peptides aléatoires sur phages. Les hexapeptides aléatoires sont exprimés à la surface des phages, en fusion à l'une de leurs protéines d'enveloppes, la protéine PIII. La sélection des phages, portant les peptides mimant l'épitope étudié (mimotopes), est réalisée par "biopanning", une technique de sélection par affinité basée sur la forte réaction de fixation de la biotine sur la streptavidine. La séquence des peptides sélectionnés peut être déterminée par séquençage du génome des phages portant l'insert oligonucléotidique codant pour le peptide aléatoire exprimé en surface. Dans un premier temps, après avoir vérifié le caractère aléatoire de la banque, nous l'avons testée en la criblant avec la streptavidine. Ceci a été réalisé sur base de données publiées dans la littérature où ont été identifiées des séquences peptidiques mimant la biotine. Par la suite, nous l'avons criblée avec un
anticorps monoclonal spécifique des épitopes A du LPS de Bruce/la en vue de l'identification d'un peptide mimant cet épitope Le séquençage des clones phagiens sélectionnés n'a permis dans aucun des deux cas de déterminer de réelle séquence consensus. Par différents moyens analytiques nous avons néanmoins essayé de mettre en évidence des séquences motifs. Il est probable que des conditions trop douces d'élution des phages sélectionnés nous aient empêché de mettre en évidence les clones de haute affinité qui seraient eux porteurs de la réelle séquence consensus

la date de réponse	1993
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	JEAN-JACQUES LETESSON (Promoteur) & Jean VANDENHAUTE (Copromoteur)