Localisation subcellulaire de protéines fusionnées au fluorochrome mCherry chez Brucella abortus et Escherichia coli

Résumé

L’α-protéobactérie modèle Caulobacter crescentus possède un cycle cellulaire complexe entrainant la génération de différents organes polaires. Un mini réseau de régulation dynamique formé de deux histidines kinases (PleC et DivJ) et d’un régulateur de réponse (DivK) est impliqué dans la génération de l’asymétrie. L’ α-protéobactérie étudiée au sein de notre laboratoire est Brucella abortus se divisant également de manière asymétrique. Des homologues de tous les acteurs impliqués dans l’asymétrie chez C. crescentus sont également présents chez B abortus. De plus, un autre homologue, absent chez C. crescentus, de DivJ et PleC et potentiellement impliqué dans ce réseau de régulation est présent chez B. abortus. Cette histidine kinase supplémentaire fut nommée PdhS (PleC/DivJ-Homologous Sensor). PdhS est proposée, au contraire de BaPleC et BaDivJ, d’intervenir comme interactant potentiel de DivK chez B. abortus. PdhS interagit en test double hybride chez la levure avec une fumarase nommée FumC. Egalement, une fusion FumC-YFP colocalise avec la fusion PdhS-CFP au vieux pôle de la grande cellule de B. abortus. L’une des hypothèses testée au cours de ce mémoire est liée à une caractéristique prédite de FumC, qui est une fumarase de classe II, d’être résistante aux chocs oxydatifs. Nous émettons l’hypothèse qu’une concentration élevée de ROS au vieux pôle (sénescent) pourrait être responsable d’une localisation polaire de FumC, caractéristique gardée au cours de l’évolution. Puisque ces ROS sont principalement produits par la chaîne de transport d’électrons, nous avons localisé les protéines de cette chaîne de transport d’électrons chez B. abortus. Pour vérifier cette hypothèse, des plasmides réplicatifs et intégratifs, compatibles au système Gateway® et permettant la fusion du gène codant pour la protéine fluorescente mCherry en amont ou aval d’une ORF d’intérêt ont été construits. L’observation des fusions protéiques à partir de vecteurs de surexpression a suggéré que cette chaîne de transport d’électrons ne localisait pas préférentiellement au pôle de la bactérie B. abortus. Puisque FumC fait potentiellement partie du cycle de Krebs, nous avons également testé la localisation intracellulaire des autres enzymes impliquées dans ce cycle. Cependant, nous avons été incapables de détecter une localisation préférentielle au vieux pole de B. abortus. Enfin, nous avons observé de manière inattendue que la fusion protéique PdhS-mCherry était capable de former des foci polaires chez E. coli. Nous avons proposé que ces foci ne représentent pas des agrégats contenant des protéines possédant une mauvaise conformation tridimensionnelle puisque la fusion PdhS-mCherry est capable de recruter la fusion protéique FumC-YFP au niveau de ces foci.

la date de réponse	2009
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Xavier De Bolle (Promoteur)