Etude du compartiment lysosomal dans le foie et le cerveau de souris CLN2 -/-

Résumé

La lipofuscinose céroïde neuronale infantile tardive (cLINCL) est une maladie neurodégénérative héréditaire causée par la déficience d’une protéase lysosomale : la tripeptidyl peptidase I. Elle se caractérise par l’accumulation intralysosomale de lipofuscine et de la sous-unité C de l’ATP synthase mitochondriale. Récemment, un modèle animal de la maladie a été conçu dans le laboratoire du Professeur Peter Lobel aux Etats-Unis(CABM, Piscataway). Il s’agit de souris « knock-out » pour le gène CLN2 codant la protéase déficiente de la cLINCL, mimant la pathologie de la maladie. Dans le but d’approfondir les connaissances actuelles sur la cLINCL, un projet de collaboration entre les deux laboratoires a été mis sur pied. Il consiste en une étude par spectrométrie de masse du contenu des lysosomes isolés de souris CLN2-/-. Ces préparations seront obtenues dans notre laboratoire par les méthodes de centrifugation différentielle et
isopycnique. Ce travail vise à caractériser le comportement des lysosomes de foie et de cerveau de souris CLN2 -/- en centrifugation, afin d’établir les bases d’une méthode préparative. Les résultats des fractionnements subcellulaires par centrifugation différentielle suggèrent, dans les tissus CLN2-/-, l’existence d’une population de lysosomes plus fragiles, libérant leur contenu enzymatique dans la fraction soluble. En revanche, les lysosomes mutants intacts, isolés dans la fraction ML, présentent un comportement semblable aux lysosomes de type sauvage dans des gradients de densité de saccharose ou de PercollR isotonique. La distribution des lysosomes a été caractérisée par la mesure de l’activité de plusieurs hydrolases acides comme marqueurs de ces organites. Après avoir vérifié que les préparations enrichies en lysosomes CLN2-/- contiennent effectivement le matériel de surcharge, ces résultats seront exploités pour la mise au point d’une méthode préparative.

la date de réponse	2006
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Michel Jadot (Promoteur)