Développement du modèle murin TyrCre:Pten^(-/-)Braf^(V600E):Abcb5-IRESeGFP pour l’étude du rôle d’ABCB5 comme marqueur des cellules souches de mélanome et mise au point d’un protocole d’immunohistochimie pour la cartographie de l’expression d’Abcb5 dans la souche murine Abcb5-IRESeGFP

Résumé

ABCB5 est un transporteur ABC exprimé principalement dans les cellules pigmentées comme les mélanocytes. Plusieurs études suggèrent que cette protéine est un marqueur d’une sous-population de cellules caractérisées par des propriétés d’auto-renouvellement et de maintien tumoral. Cependant, ces cellules souches initiant le mélanome (MMIC, Malignant Melanoma Inititating Cells) sont très controversées. Il a été montré que les cellules de mélanome présentent une hétérogénéité phénotypique réversible et qu’elles sont capables de générer une tumeur indépendamment du marqueur qu’elles expriment. L’objectif de ce mémoire est de développer un modèle murin qui nous permettra d’étudier l’existence de cellules souches cancéreuses dans le mélanome et de vérifier l’hypothèse qu’ABCB5 est un marqueur de ces cellules. Ces souris développeront spontanément des mélanomes cutanés tout en exprimant une protéine fluorescente lors de la transcription du gène Abcb5. A court terme, les tumeurs seront analysées par cytométrie de flux afin d’isoler les cellules positives pour ABCB5 dont les caractéristiques de cellules souches seront évaluées. Si nous confirmons l’existence de MMIC, cette souche murine pourrait être utilisée pour tester diverses stratégies thérapeutiques. La création de ce modèle nécessite également la caractérisation des souches parentales Abcb5-IRESeGFP et TyrCre:Pten(-/-)Braf(V600E) que nous avons croisées. La cartographie du profil d’expression d’ABCB5 dans la souris Abcb5-IRESeGFP a été entreprise. Nous avons montré qu’ABCB5 était hautement exprimé dans le testicule. Sur base de ces données, nous avons mis au point un nouveau protocole d’immunohistochimie nécessitant une perfusion trans-cardiaque avec du paraformaldéhyde et de l’acide picrique. Nos résultats préliminaires indiquent qu’ABCB5 est exprimé au niveau de la couche basale des canaux séminifères, localisant cette protéine dans les cellules souches impliquées dans la spermatogonie. La validation de la souris TyrCre:Pten Braf a également été réalisée grâce à l’analyse et au diagnostic des tumeurs développées par cette souche.

la date de réponse	2015
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Jean-Pierre Gillet (Promoteur)