Résumé
Des expériences précédentes ( Eeckhout, 1973) ont suggéré la localisation cytosolique de la catalase chez Crithidia luciliae et une localisation glycosomale chez Crithidia tasciculata (Opperdoes .e.La!., 1976). Après culture de Crithidia fasciculata , suivie de centrifugations différentielles, effectuées sur une culture de deux jours ainsi que sur une culture de trois jours, on a localisé la catalase dans la fraction cytosolique. Le Triton X100, utilisé dans le dosage de la catalase, s'est révélé assurer un rôle inhibiteuraux concentrations utilisées pour le test. Un nouveau test de dosage a été mis au point et l'effet de deux inhibiteurs de la catalase (cyanure et aminotriazole) a été testé grâce à cette nouvelle méthode de dosage. Ces expériences d'inhibition, combinées à des études de stabilité de l'enzyme à différents pH, n'ont toutefois pas permis d'infirmer la localisation cytosolique de la catalase ou de révéler l'existence de cette dernière sous forme d'isoenzymes. Nous avons criblé une banque d'ADN génomique, ainsi qu'une banque d'ADNc en utilisant comme sonde l'ADNc correspondant au gène de la catalase humaine. Des clones positifs ont été obtenus uniquement avec la banque d'ADNc. L'ADN de ces clones a été isolé. Dans des expériences de Southern blot, nous avons observé l'hybridation de deux fragments avec la sonde, l'un, existant dans tous les phages, d'une taille de 3 kb (fragment Pst 1), l'autre d'une taille de 3.8 kb (phage 1 ), ou de 4.1 kb (phage 4) (fragment Kpn 1). Une étude phylogénétique a été réalisée en utilisant les séquences de catalase déjà décrites.
| la date de réponse | 1994 |
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| langue originale | Français |
| L'institution diplômante |
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| Superviseur | Fred R Opperdoes (Promoteur) & Ernest Feytmans (Copromoteur) |