Caractérisation des fonctions de PcoA et PcoB, deux acteurs clés dans la régulation de l'homéostasie du cuivre chez Caulobacter Crescentus

Résumé

Tous les organismes sont continuellement confrontés à différents stress provenant de l’environnement et doivent s’adapter pour survivre. Ce travail se focalise sur un stress en particulier : un stress en cuivre (Cu). Le Cu est un oligo-élément métallique essentiel, impliqué dans une grande variété de processus biologiques. Cependant, en dépit de son rôle vital, le Cu peut devenir rapidement toxique à mesure que sa concentration augmente. Les bactéries ont développé différents systèmes pour faire face à un stress en cuivre. L’homéostasie du cuivre a été largement étudiée chez Escherichia coli, chez qui 3 systèmes majeurs ont été identifiés : le système Cus, le système Cue et le système Pco. Des homologues de certains de ces systèmes sont conservés chez Caulobacter crescentus, l’organisme d’intérêt de notre équipe. Ce travail vise à identifier plus précisément les fonctions ainsi que la localisation subcellulaire de deux protéines impliquées dans l’homéostasie du cuivre chez Caulobacter crescentus : PcoA et PcoB. Plus précisément, nous voulions savoir si PcoA possède un rôle similaire à son homologue chez E. coli, CueO, une multicopper oxydase périplasmique oxydant les ions Cu+ en Cu2+. Nous avons également cherché à confirmer les prédictions bioinformatiques qui situent PcoB comme ancré en membrane externe. La voie par laquelle PcoB serait transporté du cytoplasme vers la membrane externe reste encore inconnue. C'est pourquoi nous nous somme également intéressé à cette question. Il existe deux principales hypothèses de travail à ce sujet : PcoB pourrait soit emprunter la voie Sec, soit profiter du passage de PcoA via le système Tat. Par interaction avec PcoA, PcoB pourrait en effet être emporté en même temps dans le périplasme par un système de "hitchhiking". Nous proposons dans ce travail quelques pistes expérimentales pour répondre à cette question. Le travail effectué au cours de ce mémoire aura permis de mettre au point des outils génétiques et des protocoles utiles à l'équipe de recherche. En outre, nous avons pu partiellement vérifier l'hypothèse de travail établie précédemment dans le laboratoire, confirmant les localisations subcellulaires des protéines PcoA et PcoB. Ce mémoire pose également les bases expérimentales pour l'étude de la translocation de PcoA et PcoB au travers de la membrane interne

la date de réponse	2016
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Jean-Yves Matroule (Promoteur)