Application of TOF-SIMS for the detection of proteins using antibodies conjugated to metal nanoparticles

Résumé

Le ToF-SIMS (Time-of-Flight Secondary Ion Mass Spectroscopy) est une technique de spectrométrie de masse vastement utilisée en physique des matériaux, utilisant un faisceau d'ions pour bombarder des échantillons et en extraire des fragments caractéristiques. Récemment, il lui a été découvert un grand potentiel pour l’analyse de systèmes biologiques complexes, dans lesquels notamment la distribution de molécules organiques peut être obtenue. Cependant, l’étude de protéines, pourtant très importante en biologie, est difficile en ToF-SIMS, car il permet d’obtenir des informations caractéristiques uniquement pour des molécules d’environ 2000 uma maximum, ce qui limite son utilisation. Cette étude vise à lever cette limitation et contribuer au développement d’une méthode de marquage spécifique de protéines dans des systèmes biologiques complexes, tels que l’épiderme humain, et leur cartographie en ToF-SIMS, via des anticorps conjugués à des nanoparticules métalliques. Ces dernières donnant un signal connu en ToF-SIMS, la distribution spatiale donne la distribution des protéines marquées par nanoparticule. Ce travail porte sur la caractérisation des nanoparticules, suivie de leur bio conjugaison à des anticorps grâce à une molécule de couplage, et sur la caractérisation du bioconjugat formé. Le marquagesur des épidermes reconstruits a dû être optimisé et a été réalisé sous différentes conditions et différentes analyses ToF-SIMS. Les résultats ont montré que la bioconjugaison était effective et que le marquage avait permis de cibler une protéine d’intérêt dans un épiderme reconstruit. Les expériences qui ont été réalisés ont permis de déterminer les conditions optimales du marquage et ont servi de solide base pour la réalisation d’un marquage totalement spécifique et précis.

la date de réponse	21 juin 2023
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Laurent Houssiau (Promoteur)