Vérification de l'expression différentielle de gènes identifiés après differential display comparant l'expression génique lors de la sénescence réplicative et de la sénescence réplicative induite prématurément par les stress

  • Aline Chrétien

    Student thesis: Master typesMaster en sciences biologiques

    Résumé

    La technique de "differential display" a été utilisée antérieurement afin de comparer simultanément le niveau d'expression de multiples transcrits, chez des fibroblastes en sénescence induite prématurément par les stress subcytotoxiques (SIPS) par le tertbutylhydroperoxyde ou par l'éthanol, et chez des fibroblastes sénescents. Cette technique générant une proportion non négligeable de faux-positifs, il est nécessaire de vérifier ces variations du niveau de transcrits par une technique alternative. Dans un premier temps, nous avons identifié les gènes dont la différence d'expression par rapport aux cellules jeunes était commune à la sénescence réplicative et/ou aux deux types de SIPS. Ensuite, en utilisant la technique de la PCR en temps réel, nous avons confirmé cette variation d'expression pour 7 gènes identifiés, et montré que d'autres étaient des faux-positifs de "differential display". Le niveau d'expression protéique de deux de ces gènes a pu être étudié par western-blot. Ce travail ouvre la voie à l'étude de la fonction de ces 5 gènes dans la réponse cellulaire aux stress et, plus précisément, dans l'établissement de traits marquants de la sénescence cellulaire après exposition à des stress subcytotoxiques, dont le blocage du cycle cellulaire et une résistance accrue aux stimuli pro-apoptotiques.
    la date de réponse2002
    langue originaleFrançais
    SuperviseurOlivier TOUSSAINT (Promoteur)

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