Résumé
Il existe, au sein des membranes, une classe de protéines particulières dites « membranaires ». Au sein d’un génome, celles-ci représentent approximativement 25% des séquences codantes, mettant en évidence leur importance. Les protéines membranaires sont ancrées dans la membrane et ont pour caractéristique d’être riche en segments hydrophobes, rendant ces protéines insolubles. Cette particularité rend l’étude de ces dernières complexe et difficiles. La connaissance de la structure tridimensionnelle d’une protéine membranaire permettrait d’en comprendre les relations structures/fonctions. Au cours de ce travail, l’Omp2a de Brucella melitensis (Gram-négative), une porine entonneaux β, a été étudiée et caractérisée en vue de déterminer sa structure tridimensionnelle par diffraction de rayons X. Dans ce cadre, l’Omp2a a été, dans un premier temps, surproduite en corps d’inclusion sous une forme non-native et purifiée par chromatographie échangeuse d’anions. Dans un second temps, la porine a été renaturée en utilisant soit un détergent nonionique (le n-dodecyl-β-D-maltopyranoside, DDM), soit un système récent et original associant le sodium dodecyl sulfate (SDS, détergent dénaturant) et un cosolvent, le 2-méthyl-2,4-pentanediol (MPD). Après renaturation, différentes espèces sont observées sur gel SDS/PAGE correspondant, selon notre hypothèse, aux monomères, monomères renaturés et trimères. Dans l’objectif de pouvoir les étudier, nous avons tenté de les isoler par tamis moléculaire et par extraction sur gel SDS/PAGE. Dans un troisième temps, les différents partenaires obtenus à la suite de la renaturation ont été caractérisés par tamis moléculaire afin de déterminer leur poids moléculaires respectifs. Finalement, des essais de cristallogenèse ont été réalisés sur l’Omp2a renaturée (au DDM ou au SDS/MPD)
| la date de réponse | 2010 |
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| langue originale | Français |
| L'institution diplômante |
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| Superviseur | Johan Wouters (Promoteur) & Xavier De Bolle (Promoteur) |