Production et caractérisation d'anticorps contre une UDP-glucose déhydrogenase d'd'Arabidopsis thaliana

Résumé

Ce mémoire s'inscrit dans le cadre d'un projet visant à générer un pool de sondes immunologiques dirigées contre des enzymes intervenant dans la biosynthèse de la paroi cellulaire végétale. Le but particulier de ce travail est d'obtenir un polysérum spécifique des UDP-glucose déhydrogénases végétales (UDP-gldh), enzymes impliquées dans la biosynthèse des précurseurs polysaccharidiques de la paroi. La stratégie choisie a été d'immuniser un lapin et une poule à l'aide de deux peptides synthétiques couplés à la KLH, choisis dans des zones conservées entre les différentes séquences d'UDP-gldh végétales présentes dans les banques de données. En parallèle à ce volet d'immunisation, nous avons procédé au clonage du gène codant pour une UDP-gldh d'Arabidopsis thaliana; la protéine correspondante a ensuite été exprimée en bactérie. L'UDP-gldh recombinante a été purifiée et utilisée comme contrôle positif dans des tests de type dot-blot et Western-blet afin d'évaluer la spécificité des anticorps produits par les animaux immunisés. Nos résultats confirment le caractère immunogénique des peptides synthétiques couplés, qui constituent une bonne alternative à l'utilisation de protéines exprimées sous forme recombinante puis purifiées pour les immunisations. Tant le polysérum de lapin que les anticorps préparés au départ d’œufs de poule sont capables de détecter la présence d'UDP-gldh recombinante dans des extraits protéiques bactériens. Cette réponse spécifique est toutefois accompagnée, dans le cas des anticorps de poule, d'un bruit de fond particulièrement élevé dû à la fixation d'anticorps sur des protéines de coli

la date de réponse	2001
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Pierre Van Cutsem (Promoteur)