Le promoteur du gène reelin de la souris

Résumé

Le gène reelin détient un rôle central dans le développement cérébral embryonnaire et est exprimé de manière particulièrement intense par les neurones de Cajal-Retzius de la zone marginale du èortex. Alors que la structure génomique du gène et de nombreuses informations concernant la voie de signalisation de la protéine reelin sont connues, on dispose de très peu d'informations sur la régulation transcriptionnelle de reelin. C'est pourquoi nous avons commencé une étude du promoteur du gène reelin chez la souris. Nous avons montré que, chez la souris comme chez l'homme, le gène reelin est dépourvu de boîte TAT A et des autres éléments classiques de régulation transcriptionnelle, mais contient par contre un îlot CpG de 1.4kb couvrant une partie de la région promotrice et environ 500pb de l'exon 1. Nous avons montré que le pattern de méthylation de cet îlot est invariant à divers stades du développement et dans divers tissus, de sorte que la méthylation n'intervient probablement pas de manière cruciale dans la régulation transcriptionnelle. Par des programmes de prédiction, nous avons mis en évidence la présence de nombreux sites potentiels de fixation pour des facteurs transcriptionnels, parmi lesquels des facteurs comme Pax5, spécifiques du tissu nerveux. Ces résultats peuvent servir de préalable à des analyses biochimiques des sites de fixation. Une séquence de 1.7 kb contenant le promoteur minimal de souris a été ensuite étudiée par transfections transitoires de cinq constructions réalisées par délétions progressives dans des
cellules P19. Les résultats préliminaires suggèrent qu'il existe deux sites potentiels de fixation de facteurs stimulants séparés par un site potentiel de fixation d'un facteur inhibiteur. La comparaison avec le promoteur humain montre une certaine similitude puisque ce dernier contient aussi deux régions activatrices flanquant une région inhibitrice. Afin de disposer de l'ensemble de la région génomique contenant les sites de régulation, nous avons isolé un clone PAC de souris qui contient 20kb de DNA génomique en amont du site d'initiation, ainsi que les premiers exons de reelin et surtout l'ensemble du premier intron dont la taille est d'environ 70-80 kb. Ce clone devrait s'avérer très utile pour cibler les régions régulatrices par analyse transgénique in vivo

la date de réponse	2000
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Andre Goffinet (Promoteur)