Identification de gènes de virulence chez Brucella melitensis 16M par Signature Tagged Mutagenesis

  • Amélie Dricot

    Student thesis: Master typesMaster en biochimie et biologie moléculaire et cellulaire

    Résumé

    Les mécanismes de virulence mis en jeu par Brucella sp. sont très peu connus et de nombreuses questions restent posées quant à la relation de ce pathogène avec son hôte. Dans le but de mieux comprendre les mécanismes de virulence de Brucella, nous avons dans un premier temps criblé in vivo une banque de 3 fois 96 mutants transpositionnels de Brucella melitensis via la méthode de « Signature Tagged Mutagenesis » (STM) qui nous a permis de sélectionner 11 mutants atténués in vivo. L'atténuation de ces 11 mutants a ensuite été quantifier en souris BALB/c selon le modèle d'infections compétitives, de même leur virulence dans des modèles in vitro (macrophages bovins et cellules HeLa) a été étudiée. Leur résistance aux stress oxydatifs et acides ainsi que leur capacité à pousser sur un milieu pauvre ont été investigués De même il a été montré qu'aucun des mutants n'étaient rugueux. Enfin, l'obtention des fragments d'ADN bordant le tagged mini-Tn5 via les méthodes de R:R arbitraire(Arbitrary Polymerase Chain Reaction) et PCR inverse (IPCR), nous a permis d'identifier les gènes mutés. Les gènes identifiés peuvent être classés en différentes catégories reprenant des gènes de métabolisme, un gène de système flagellaire, un gène de symbiose et des genes de résistance aux stress
    la date de réponse2000
    langue originaleFrançais
    SuperviseurJEAN-JACQUES LETESSON (Promoteur)

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