Etude fonctionnelle de TRIM29, une protéine impliquée dans la réponse des kératinocytes humains exposés à des stress répétés et sub-létaux aux UVB

Résumé

L’épiderme constitue notre première couche de protection contre les rayons ultraviolets de type B (UVB). Dans ce mémoire, nous avons étudié une protéine dont l'abondance est modifiée lors de la réponse de kératinocytes humains à des doses répétées et sub-létales d’UVB : la protéine Tripartite Motif 29 (TRIM29). La protéine TRIM29 a été caractérisée dans le cadre de la pathologie Ataxia Telangiectasia (AT). Cette pathologie génétique neurodégénérative présente une mutation dans le gène codant pour la protéine ATM et montre, entre autre, un retard dans l’induction de p53. Une complémentation des cellules de patients atteints d’AT avec le locus codant pour la protéine TRIM29 restore cette induction de p53, ce qui amène à poser l’hypothèse que la protéine TRIM29 serait impliquée dans la voie intracellulaire de réponse aux dommages à l’ADN. Dans un premier temps, nous avons étudié le profil d’abondance de cette protéine TRIM29 et de son ARNm au cours du temps après des expositions aux UVB. Nous avons mis en évidence une augmentation de l’abondance de TRIM29 à 4 h et 16 h après exposition aux UVB aussi bien au niveau protéique qu’au niveau de l’ARNm. À 64 h après exposition, cette augmentation n’est plus que faiblement visible. Dans un second temps, nous avons étudié la possibilité d’interaction protéique entre TRIM29 et ATM/ATR et p53, ATR étant l’équivalent de la protéine ATM dans le cas plus spécifique des stress aux UV. Pour cela, les extractions protéiques ont été réalisées à 16 h après les expositions aux UVB. Nous avons montré qu’il n’y avait pas d’interaction de TRIM29 avec ATM ou ATR mais bien avec p53. Au vu de ces résultats, nous avons étudié la localisation de TRIM29 dans les cellules exposées aux UVB afin de vérifier la possibilité d’une délocalisation dans le noyau qui serait compatible avec un rôle de TRIM29 sur p53. Les marquages par immunofluorescence réalisés sur les kératinocytes mettent en évidence cette délocalisation à 16 h après exposition aux UVB. Enfin, nous avons étudié l’effet de l'invalidation de l'expression de TRIM29 par un shRNA ciblant l’ARNm de TRIM29. Au vu des faibles différences observées entre les cellules où l'expression de TRIM29 est invalidée et les cellules contrôles, nous émettons différentes perspectives quant au(x) rôle(s) potentiel(s) de TRIM29 dans la réponse aux UVB.

la date de réponse	2007
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Olivier TOUSSAINT (Promoteur)