Etude du récepteur-like kinase WAK1 d'Arabidopsis thaliana: mise en évidence et caractérisation de l'interaction du domaine extracellulaire de WAK1 avec la pectine

Résumé

Le récepteur-like kinase WAK1 (Wall-associated kinase 1), membre de la famille des WAK/WAKL, est impliqué dans l'élongation cellulaire et la réponse de défense aux pathogènes. WAK1 est une protéine transmembranaire constituée d'un domaine extracellulaire lié à la paroi cellulaire et d'un domaine cytoplasmique Ser/Thr kinase. L'activation de WAK1 pourrait être induite via sa liaison à la matrice extracellulaire. Le but de ce travail a été de mettre en évidence et de caractériser la liaison du domaine extracellulaire de WAK1 avec la pectine. Pour ce faire, une partie de la séquence du domaine extracellulaire de WAK1 d'Arabidopsis thaliana a été clonée et exprimée de manière soluble en levure. En utilisant un test de liaison dérivé de la technique ELISA et des pectines purifiées ou extraites de cellules d'Arabidopsis thaliana cultivées en suspension cellulaire, nous avons montré, in vitro, que le domaine extracellulaire de WAK1 reconnaît spécifiquement des homogalacturonanes et des oligogalacturonides en conformation "egg box". Nous avons mis en évidence, qu'indépendamment de la liaison à la pectine, le domaine extracellulaire de WAK1 forme probablement des complexes multimériques. Des analyses in silico (HCA, Hydrophobic Cluster Analysis et RBD, Receptor Binding Domain) de la séquence du domaine extracellulaire ont permis d'identifier des domaines putatifs d'interaction. La réalisation de mutations ciblées dans ces domaines nous a permis de démontrer l'implication des résidus R67, R91, R166, K101 et K102 dans la liaison à la pectine.

la date de réponse	2006
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Johan MESSIAEN (Jury), Pierre Van Cutsem (Jury), Françoise Liners (Jury), J. Dommes (Jury) & B. Watillon (Jury)