Etude du rôle joué par le facteur de transcription HIF-1 dans la protection contre l'apoptose: utilisation de siRNA anti-HIF-1α

  • Jean-Philippe Cosse

    Student thesis: Master typesMaster en sciences biologiques

    Résumé

    Lorsque la tension en oxygène du milieu extra-cellulaire diminue, la cellule perçoit cette diminution et réagit afin de maintenir son homéostasie. La plupart des réponses adaptatives sont dépendantes de l'activation d'un facteur de transcription spécifiquement
    activé en condition d'hypoxie, HIF-1. HIF-1 est un hétérodimère constitué des sous-unités ARNT et HIF-la : seule la sous-unité HIF-la est régulée par l'hypoxie. Ce facteur, en plus de permettre l'adaptation des cellules à l'hypoxie, semble être également impliqué dans la modulation de l'apoptose. Toutefois, son rôle dans le processus apoptotique paraît dépendre du degré d'hypoxie, si l'hypoxie est sévère ou prolongée, la présence de HIF-1 semble favoriser l' apoptose alors que si l'hypoxie est plus légère, HIF-1 apporte aux cellules une protection contre l'apoptose. L'objectif de ce mémoire était de déterminer le rôle de HIF-1 dans la protection contre l' apoptose apportée par l'hypoxie. Pour cela, nous avons inhibé l'expression de la sous-unité HIF-la, en utilisant la technique d' ARN interférant. Dans un premier temps, nous avons optimisé les conditions de transfection des siRNA anti-HIF-la dans les cellules HepG2. L'inhibition maximale de l'expression de HIF-la que nous avons obtenue 48h posttransfection est d'environ 50%. Ensuite nous avons observé quel effet cette inhibition avait sur l' activité transcriptionnelle de HIF-1. Les résultats montrent que l ' activité transcriptionnelle de HIF-1, mesurée par un système rapporteur et en suivant l' expression de gènes cibles, est réduite de moitié.
    L'effet de l'inhibition de l'expression de HIF-la et de la diminution de l'activité transcriptionnelle de HIF-1 a ensuite été étudiée sur des cellules incubées en hypoxie en présence de ter-butyl hydroperoxyde (t-BHP) ou d'étoposide. Le t-BHP et l'étoposide sont
    capables d'induire l'apoptose des cellules, apoptose inhibée par l'hypoxie. Si HIF-la est impliqué dans cette protection, une mort cellulaire accrue lorsque celui-ci est inhibé devrait être observée. Les résultats obtenus lors des différentes expériences réalisées sont
    difficilement interprétables car le siRNA contrôle (scramble) ainsi que les agents transfectant interfèrent également.
    la date de réponse2004
    langue originaleFrançais
    SuperviseurCarine Michiels (Promoteur)

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