Résumé
Ce travail est une contribution à l'étude de la régulation de l'expression de deux gènes, omp2a et omp2b du locus omp2 chez B. melitensis 16M. Ces deux gènes encodent les porines Omp2a et Omp2b dont l'activité pore-formatrice est différente. L'organisation du locus omp2 est très conservée chez les différentes espèces de Brucella. Les deux gènes sont orientés de manière opposée et séparés par une région d'environ 830bp contenant un promoteur actif, le promoteur du gène omp2b. L'Omp2b est exprimée chez Brucella tandis que la protéine Omp2a n'y a jamais été détectée mais on ne peut exclure qu'un promoteur actif en amont du gène omp2a soit fonctionnel à un moment du cycle de vie de la bactérie. Le but de ce travail est d'étudier l'expression de ces deux gènes chez B. melitensis 16M, puis lors d'une infection en macrophages bovins et en cellules HeLa. Nous avons utilisé un outil génétique, le gène rapporteur gfpmut3a, encodant la protéine fluorescente verte, la GFP. Ce gène rapporteur a étéplacé en aval des promoteurs des gènes omp2a et omp2b. Nous avons tout d'abord montré l'activité du promoteur du gène omp2b chez B. melitensis en culture liquide en milieu liche, alors que le promoteur potentiel du gène omp2a est inactif dans les mêmes conditions. Lors d'infections en macrophages bovins et en cellules HeLa, la fluorescence de la GFP n'a été détectée que lorsque le gène rapporteur se trouve en aval du promoteur du gène omp2b. Enfin, une étude des effets potentiels de la surexpression des deux gènes sur la virulence de B. nielitensis 16M a été réalisée grâce à deux plasmides permettant la production accrue des porines Omp2a ou Omp2b
| la date de réponse | 2000 |
|---|---|
| langue originale | Français |
| Superviseur | JEAN-JACQUES LETESSON (Promoteur) |