Caractérisation d'une sonde recombinante anti-alginates produite par phage display

Résumé

Le but de ce mémoire était de contribuer à la caractérisation d'une sonde recombinante contre des alginates. Les alginates sont des polysaccharides acides extraits d'algues brunes, importants en agroalimentaire en tant qu'agents épaississants, gélifiants, conservant, etc. Ce sont des copolymères d'acide guluronique et d'acide mannuronique. Sensible aux cations présents en solution, l'acide guluronique induit en présence de calcium une conformation tridimensionnelle dite en « egg box ». Vu la carence en sondes spécifiques contre les alginates, il était intéressant de caractériser et d'optimiser la production d'une telle sonde existant au laboratoire, pour son utilisation en agroalimentaire, mais aussi pour l'étude des aspects physiologiques et signalétiques de ce polysaccharide. Les anticorps recombinants isolés par criblage de banques « phage display », sont normalement produits sous deux formes différentes : sous forme de protéine de fusion exprimée en surface du phage M13, et sous forme soluble. La production de phage-anticorps a été réalisée et ceux-ci ont été caractérisés pour leur reconnaissance des alginates en présence d'ions calcium. La structure en « egg box » est bien détectée et les ions magnésium déstabilisent cette conformation comme le prévoit la théorie. Cette sonde nous a permis de différencier des lots d'alginates d'origines diverses. L'utilisation de ces sondes sous forme de phage peut toutefois poser problème en termes de bio-sécurité. De plus, leur utilisation en microscopie montre que la taille des phages-anticorps ne permet pas une localisation efficace des alginates sur des coupes de Fucus vesiculosus. Si les anticorps recombinants sous forme soluble permettent la détermination et la localisation simple, précise et rapide d'un épitope, leur production peut néanmoins poser problème. . . .

la date de réponse	2005
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Pierre Van Cutsem (Promoteur) & Françoise Liners (Copromoteur)