Caractérisation de RicA, une protéine sécrétée par Brucella abortus

Résumé

Brucella abortus est une bactérie pathogène intracellulaire dont la virulence est reliée à sa capacité à proliférer dans différents types de cellules à l’intérieur d’organelles dérivées du réticulum endoplasmique. Dans le but de mettre en place ces organelles, B. abortus modifie le trafic vésiculaire. Une telle modification est également retrouvée chez d’autres pathogènes, tels que Legionella pneumophila et Salmonella enterica et nécessite la sécrétion de protéines effectrices permettant, entre autres, une modulation du trafic vésiculaire intracellulaire normal de la cellule hôte. Néanmoins, bien que le système de sécrétion de type IV de B. abortus ait été montré nécessaire à sa prolifération intracellulaire, aucune protéine sécrétée de Brucella spp. avec une fonction effectrice n’est connue. Dans le cadre de la recherche de protéines effectrices, un crible double-hybride permit de montrer l’interaction entre RicA, une protéine de Brucella spp., et Rab2, une petite GTPase. Un test de sécrétion in vitro permit de montrer la sécrétion de 3Flag-RicA et de RicA-3Flag par B. abortus. De plus, des études utilisant un mutant de délétion pour ricA suggèrent que RicA aurait un effet sur la cinétique du trafic intracellulaire de B. abortus. Ces particularités de RicA, suggérant un caractère effecteur de cette protéine, nous ont poussés à tenter de caractériser sa sécrétion ainsi que son effet sur la
cellule eucaryote. Dans le but de déterminer les acides aminés impliqués dans la sécrétion de RicA, l’utilisation du test de sécrétion in vitro afin de tester la sécrétion de formes mutées de RicA gardant leur capacité d’interaction avec Rab2 fut proposée comme approche expérimentale. Des souches de B. abortus 2308 produisant des formes mutées de la fusion 3Flag-RicA de manière stable ont été isolées et permettront de procéder au test de sécrétion in vitro. Afin de caractériser l’effet de RicA sur la cellule hôte, la levure Saccharomyces cerevisae fut proposée comme modèle eucaryote dans une approche expérimentale se basant sur la production de protéines bactériennes en levure. Cette approche a consisté à mettre au point un test utilisant des protéines rapportrices comme témoin de l’état du trafic vésiculaire en levure résultant de la production des protéines bactériennes. L’utilisation de LidA, un effecteur de L. pneumophila, permit de mettre au point le test. RicA fut également employé dans ce test et ne semble pas avoir un effet modulateur sur le trafic de la levure visible dans notre test. L’utilisation de RicA dans ce test permit de montrer une forte toxicité de RicA pour la levure, suggérant son caractère effecteur.

la date de réponse	2010
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Xavier De Bolle (Promoteur)