Caractérisation de Cdk11, une nouvelle Cdk impliquée dans la régulation de la transcription, dans le modèle levure Schizosaccharomyces pombe

Résumé

Les Cdks sont des sérine/thréonine kinases impliquées dans la régulation du cycle cellulaire et dans la régulation de la transcription. La kinase Cdk11 est phylogénétiquement reliée aux Cdks « transcriptionnelles » qui phosphorylent le domaine C-terminal (CTD) de la plus grosse sous-unité de l’ARN polymerase II. Le gène cdk11 est présent chez tous les eucaryotes à l’exception de la levure Saccharomyces cerevisiae. Dans ce mémoire, nous avons étudié et caractérisé Cdk11 chez la levure modèle Schizosaccharomyces pombe. Chez les eucaryotes supérieurs, deux isoformes sont détectées: Cdk11p58, impliquée dans la régulation du fuseau mitotique est exprimée uniquement durant la phase G2/M, et Cdk11p110, qu’une série d’évidences implique dans la régulation de la transcription et/ou dans l’épissage, dont l’expression est constitutive. Le génome de S. pombe contient une séquence apparentée à Cdk11encodant une protéine de 46 kDa homologue à p58. L’analyse de l’expression de Cdk11 chez S. pombe a révélé qu’elle n’était pas régulée durant le cycle cellulaire. Cdk11 est présente dans le noyau et forme un complexe soluble, in vivo, avec l’homologue de la cycline L chez S. pombe (Plh1). La purification de Cdk11-Plh11 par « Tandem Affinity Purification » (TAP), couplée à la spectrométrie de masse, a révélé d’autres partenaires potentiels dont deux RNA hélicases et un facteur de transcription. Sur base de l’appartenance de Cdk11 à la famille des Cdks « transcriptionnelles », nous avons testé son activité kinase pour le substrat GST-CTD in vitro et l’effet de l’absence de cdk11 sur le niveau de phosphorylation du CTD in vivo. Dans les deux cas, ces expériences mettent en doute que la phosphorylation du CTD constitue le rôle biologique de Cdk11-Plh11, mais la localisation sur la région 3’ du locus act1, montrée par immunoprécicpitation de chromatine (ChIP), supporte toutefois une connection avec la transcription.

la date de réponse	2009
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Damien Hermand (Promoteur)