Biosynthèse de la Cathepsine D dans des cellules HepG2. Effet d'une surcharge lysosomale

Résumé

La Cathepsine D est une endopeptidase lysosomale à aspartate apparentée à d'autres protéases à aspartate non-lysosomales comme la rénine et la pepsine. Le ciblage vers les lysosomes de cette enzyme se fait via la voie du Mannose-6-Phosphate. La Cathepsine D est synthétisée sous forme d'un précurseur inactif qui subit, pendant son trajet vers les lysosomes, deux clivages protéolytiques menant vers les formes intermédiaire et mature de l'enzyme. Les lysosomes constituent le site de dégradation majeur dans la cellule. Ils se caractérisent par une densité élevée. Cette densité importante peut être liée à la formation d'une matrice insoluble dans l'organite. La fonction de cette matrice est inconnue. Au cours de ce travail, nous avons tenté d'étudier le rôle que pourrait jouer la matrice intralysosomale dans la biosynthèse d'une hydrolase lysosomale, en choisissant la Cathepsine D comme modèle. La premier étape de nos travaux a consisté à suivre la biosynthèse de la Cathepsine D dans les cellules HepG2, pour mettre en évidence les trois formes moléculaires de cette protéine. Dans un deuxième temps, nous avons soumis les cellules HepG2 à une surcharge lysosomale, un traitement qui conduit à la disparition des lysosomes denses. Nous avons suivi la maturation protéolytique de la Cathepsine D dans ces cellules. Nos résultats indiquent que le saccharose inhibe le deuxième clivage protéolytique de l'enzyme. Des expériences de maturation, réalisées in vitro, ont confirmé les résultats obtenus à partir de cellules intactes. L'ensemble de nos résultats s'accordent avec l'hypothèse d'un rôle joué par la matrice insoluble du lysosome, dans la biosynthèse de la Cathepsine D.

la date de réponse	2001
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Michel Jadot (Promoteur)