Étude de la sénescence induite prématurément par les stress UVB dans les kératinocytes épidermiques normaux humains

Résumé

Le sujet de cette thèse concerne la caractérisation des kératinocytes épidermiques normaux humains (NHEKs) en sénescence induite prématurément par des stress UVB (SIPS- UVB).
La première partie de ce travail a consisté en la mise au point d’un modèle in vitro de SIPS-UVB dans les NHEKs. En exposant ces cellules de manière répétée à une dose subcytotoxique d’UVB nous avons induit un phénotype sénescent montrant un arrêt irréversible du cycle cellulaire, une augmentation de la proportion de cellules positives à la SA-betagalactosidase, des dommages à l'ADN non réparés et une activation à long terme de la réponse aux dommages à l'ADN (DDR). En parallèle, nous avons également mis en avant ces marqueurs dans un modèle de senescence induite par passages successifs en culture (sénescence pseudo-réplicative) chez les NHEKs. Sur base d’une analyse transcriptomique RNAseq, nous avons mis en évidence que les NHEKs sénescents présentent une diminution de l'expression de plusieurs transporteurs d'acides aminés, associée, chez les NHEKs en SIPS-UVB, à des niveaux intracellulaires réduits de glycine, d'alanine et de leucine. Ceci pourrait être reconnu comme un nouveau marqueur de sénescence d’autant plus qu’il est également observé chez les fibroblastes en sénescence réplicative. De plus, l'inhibition chimique du transporteur de glycine SLC6A9/glyt1 est capable d’induire certains marqueurs de sénescence chez les NHEKs.
Dans un deuxième temps, nous avons étudié le profil de sécrétion des NHEKs en SIPS- UVB, par une étude avec a priori de l’expression génique des interleukines IL-6 et IL-8, de certains facteurs de croissance ou encore de la métalloprotéinase MMP-9, basée sur le SASP des fibroblastes sénescents. Cette première approche a permis de mettre en avant une modification dans l’expression de ces facteurs survenant au cours du temps. Par la suite, nous avons réalisé une analyse protéomique sans a priori afin de déterminer le SASP des NHEKS en SIPS-UVB à différents temps après induction. Il semble ainsi que ce SASP, bien que présentant des facteurs communs aux différents timing, possède des facteurs propres à chaque timing. De plus, ces facteurs sécrétés sont en partie retrouvés dans le SASP d’autres types cellulaires. Nous rapportons de plus que les NHEKs sénescents (pseudo-réplicative et SIPS-UVB) sécrètent des facteurs protéiques qui influencent la migration des cellules cSCC A431, effet qui n’avait encore jamais été rapporté pour le SASP des NHEKs sénescents.

la date de réponse	24 sept. 2021
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Sponsors	Université de Namur
Superviseur	Florence Debacq-Chainiaux (Promoteur), Patsy Renard (Président), Yves Poumay (Jury), Isabelle Petropoulos (Jury) & Olivier Pluquet (Jury)