Étude des gènes essentiels à l'internalisation de Brucella abortus dans les macrophages

: une approche Tn-seq

Résumé

Brucella abortus est un pathogène gram-négatif du groupe des a-proteobactéries et responsable de la brucellose bovine, une anthropo-zoonose mondiale. Ces bactéries intracellulaires facultativement extracellulaires entrainent l'avortement des femelles gestantes ainsi que la stérilité chez les mâles. Récemment, une étude a montré que les bactéries nouvellement dérivées de la division (appelées « newborns ») représentent le type cellulaire infectieux prédominant. Afin d'étudier les facteurs des newborns pouvant être impliqués dans les étapes précoces de l'infection (adhésion et/ou invasion), une approche « Tn-seq » a été réalisée chez B. abortus 2308 à un court temps d'infection. L'analyse statistique des résultats a mis en évidence 77 gènes pouvant conduire à une faible adhésion/invasion/survie des bacteries au sein des cellules hôtes ainsi que 8 gènes montrant un avantage en terme d'internalisation/survie dans les cellules hôtes. Premièrement, wadB (glycosyltransférase) et pgk (phosphoglycérate kinase) ont été choisis comme contrôles positifs afin de valider les données du Tn-seq. Via la construction de mutants de disruption pour ces gènes, des infections de macrophages RAW 264.7 et des comptages CFU ( « colony-forming units »), nous avons montré que ces mutants sont atténués à 2 h post-infection (Pl). Les mêmes expériences réalisées avec un mutant de disruption pour gmd (GDP mannose déhydratase) et une souche délétée pour wzm (le composant transmembranaire de l'ABC transporteur de la chaine O du LPS) ont montré une meilleure entrée dans les cellules hôtes pour ces mutants et une forte atténuation pour la souche Llwzm à 24 h Pl. Grâce à ces résultats, une interprétation possible serait que la chaine O pourrait inhiber la phagocytose des macrophages professionnels et que l'accumulation de celle-ci au sein du cytoplasme serait toxique pour la bactérie. Enfin, l'implication de la boucle RGD (Arginine - Glycine - Aspartate) de la porine Omp2b dans l'adhésion/l'invasion des macrophages RAW 264.7 a été étudiée en la mutant en un motif QGQ (Glutamine - Glycine - Glutamine) chez B. abortus 2308 et chez le mutant de disruption gmd et la souche Llwzm. Les infections réalisées avec ces souches suggèrent que ce motif n'est pas crucial pour les mécanismes d'adhésion et/ou d'invasion de la bactérie.

la date de réponse	14 janv. 2016
langue originale	Français
L'institution diplômante	Universite de Namur
Superviseur	Xavier De Bolle (Promoteur)