Étude de la fonction de TMEM45A dans l'épiderme humain normal et pathologique

  • Michaël Goulard

Student thesis: Master typesMaster en biochimie et biologie moléculaire et cellulaire

Résumé

Récemment, il a été montré que l'expression de TMEM45A est corrélée à la kératinisation épidermique, mais la fonction de ce gène reste inconnue. Ce mémoire se divise en deux parties : le développement et la mise au point d' outils permettant d'analyser !'exocytose des kératinocytes dans le but d' étudier un rôle éventuel de TMEM45A dans l'exocytose des kératinocytes, et l'étude de l'expression et de la régulation éventuelle de l'expression de TMEM45B, un autre membre de la famille TMEM45. Des cultures confluentes de kératinocytes ainsi que des épidermes humains reconstruits sont utilisés comme modèles. Lors de la première partie, consacrée à la mise au point d' outils permettant d'analyser l'exocytose des kératinocytes, nous avons utilisé l' ionomycine, un ionophore sélectif, afin d' induire l' exocytose. L'exocytose d' A TP a également été analysée. Des détections imrnunofluorescentes de LAMP 1, une protéine membranaire associée aux lysosomes, ont été réalisées afin d'analyser la potentielle redistribution de LAMPl concomitante avec l' exocytose. Etant donné que l' invalidation de TMEM45A ne donne aucun phénotype apparent et n'empêche pas l'épiderme de se former normalement, il a été supposé que l' invalidation de TMEM45A peut être compensée par TMEM45B. La deuxième partie de ce mémoire est consacrée à l'étude de l'expression et de la régulation éventuelle de l' expression de TMEM45B. Nous avons réalisé une analyse de l'expression des ARN messagers de TMEM45B par PCR quantitative après transcription réverse. Nous avons également réalisé des détections imrnunofluorescentes de la protéine codée par TMEM45B, la protéine transmembranaire 45B. Finalement, nous avons réalisé une analyse de l' expression de la protéine par Western Blot. Ces données ne sont pas encore complètes et nécessitent encore de nombreuses mises au point. Nous n'avons pas réussi à mettre au point entièrement les outils permettant d'analyser le rôle de TMEM45A dans !'exocytose, ni de caractériser parfaitement l' expression de TMEM45B, mais ces recherches nécessitent encore des mises au points et soulèvent également de nombreuses interrogations.
la date de réponse2016
langue originaleFrançais
L'institution diplômante
  • Universite de Namur
SuperviseurYves Poumay (Promoteur)

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