Approche génétique et biochimique du rôle de la protéine Pof14, identifiée en double-hybride comme interacteur de la protéine Skp1 de Schizosaccharomyces pombe

Le SCF (Skp1-Culline-protéine à F-box) est une ubiquitine ligase qui cible spécifiquement les protéines dans la voie de la dégradation par le protéasome 26S. La protéine à F-box (du nom du motif commun reconnu par Skp1) est le composant qui reconnaît spécifiquement le substrat à ubiquitinyler. En réalisant un crible double-hybride avec Skp1 comme appât, nous avons découvert une nouvelle protéine qui possède un motif à F-box putatif. Notre projet vise à déterminer le rôle de cette protéine, Pof14 (pour " S. pombe F-box protein ") chez S. pombe.
Nous avons montré que le motif à F-box détecté est fonctionnel et nous avons vérifié in vivo l'interaction entre Pof14 et Skp1 par coimmunoprécipitation. Nous avons par ailleurs construit une souche délétée pour le gène pof14. L'analyse du délétant indique que le gène pof14 n'est pas essentiel à la croissance en milieu riche. Une analyse de la séquence protéique suggère la présence d'un motif " PEST " en C-terminus de Pof14. Cette analyse est confortée par la donnée d'instabilité de Pof14 (temps de demi vie de 20 minutes). Un crible double-hybride réalisé dans le but de découvrir des partenaires de Pof14 nous a permis d'isoler parmi quatre candidats, la protéine Erg9, une squalène synthétase impliquée dans le métabolisme de l'ergostérol. Une analyse de sa séquence peptidique révèle la présence d'un motif " PEST ", séquence CIS impliquée dans la ciblage de la protéine aux SCF et potentiellement au SCFPof14. "