Mise au point d'un milieu de culture sans sérum pour des fibroblastes diploïdes humains

  • Raes, Martine (Responsable du Projet)
  • Eliaers, Francois (Technicien)
  • VERTEZ, Marie-Jeanne (Technicien)

Projet: Recherche

Détails du projet

Description

Le but de ce projet est la mise au point d'un milieu de culture sans sérum pour les cellules MRC-5 (fibroblastes diploïdes issus de poumons foetaux humains) utilisées dans l'industrie pharmaceutique pour la production de vaccins destinés à l'homme.
Le sérum animal (principalement d'origine bovine) est essentiel pour la culture cellulaire car il est une source importante de nutriments, de facteurs de croissance ou d'attachement, d'agents de protection contre les stress' Il est également utilisé pour inhiber la trypsine lors des repiquages ou dans le milieu de congelation des cellules. Cependant, il présente plusieurs inconvénients importants :
- un coût élevé,
- une variabilité de composition et donc d'activité de lot à lot,
- la composition exacte du sérum est inconnue,
- l'approvisionnement en sérum de qualité devient de moins en moins sûre et surtout
- le sérum est une source d'agents pathogènes comme les bactéries, les virus ou les agents responsables de l'encéphalopathie spongiforme bovine (ESB, risque théorique).
De ce fait, la tendance actuelle est d'éliminer le sérum et même tous les produits d'origine animale du milieu de culture de cellules destinées à produire des vaccins ou des protéines recombinantes à usage thérapeutique pour l'homme.
Plusieurs milieux de culture sans sérum sont déjà commercialisés pour des cellules transformées (par exemples pour les cellules CHO, cellules d'hybridomes ou de myélomes) mais rien n'est disponible pour des cellules normales comme les cellules MRC-5. De par leur durée de vie limitée (40-60 divisions cellulaires), ces cellules sont particulièrement exigeantes quant à la qualité du milieu de culture.
Nous développons un protocole de culture à long terme (plusieurs semaines) où le sérum est éliminé au niveau du milieu de culture, de l'inhibition de la trypsine et du milieu de cryopréservation. Les cellules adaptées dans ce milieu sans sérum seront par la suite caractérisées au niveau moléculaire.
statutFini
Les dates de début/date réelle1/04/9831/03/01

mots-clés

  • cellules diploides
  • culture cellulaire
  • milieu sans sérum
  • cellules diploïdes
  • milieu sans serum
  • fibroblasts